En esta práctica, vamos a realizar una tinción simple con azul de metileno con yogur y una tinción de gram con E. coli.
Los materiales a usar son los siguientes:
-papel de filtro
-pipetas pasteur
-asa de siembra
-pinzas
-mechero de alcohol
-portas y cubres
-agua destilada
-alcohol
-violeta de genciana
-lugol
-safranina
-azul de metileno
Comenzamos cogiendo una muestra de yogur con el asa de siembra, y junto con una gota de agua destilada, lo ponemos en un porta y mezclamos bien para que se homogeinicen. A continuación lo ponemos a secar en el mechero pasándolo encima de la llama teniendo cuidado de no quemarlo. El asa de siembra antes de tomar la muestra se quema al fuego y después de usarlo también.
También tomamos una muestra de E. coli con el mismo procedimiento: quemar asa de siembra, tomar muestra (enfriandolo antes para no matar a los microorganismos), y junto con una gota de agua destilada lo ponemos en el porta y homogeneizamos, y lo secamos al fuego sin llegar a quemarlo.
Cogemos la muestra de yogur que tenemos en el porta ya seco, y comenzamos con la tinción simple con azul de metileno, poniendo una cantidad de este colorante de forma que cubra toda la muestra de yogur y esperamos 1 minuto a que haga efecto y aclaramos con agua destilada y dejamos secar al aire libre porque mientras se seca estamos haciendo también la tinción de gram.
Con la muestra de E.coli ya seca, le ponemos el violeta de genciana y lo dejamos actuar 1 min, y después sin aclarar, le echamos el lugol, arrastrándolo primero y después dejando una cantidad que actúe 1 minuto. Luego lavamos con agua destilada y a continuación echamos alcohol durante 30 seg hasta que el alcohol que estás echando caiga incoloro. Lavamos con agua y le echamos la fushina dejándola actuar 3 min y después lavamos con agua destilada. Secamos al aire libre o con la ayuda del mechero.
Una vez secos, tanto la muestra de yogur como la muestra de E.coli las llevamos al microscopio con aceite de inmersión para verlos al x100
Yogur:
E. coli:
