Levine blue agar: preparación del medio de cultivo y siembra

En esta práctica vamos a preparar un medio de cultivo Levine blue agar.

Necesitaremos los siguientes materiales:

- papel de filtro

- vaso de precipitado

- cuchara de metal

- peso

- cazuela

- calentador

- varilla agitadora de vidrio

- matraz erlenmeyer

- algodón graso

- mechero de alcohol

- asa de siembra

- bacteria E.coli

- agua destilada

- placa de petri

Cogemos 7,05gr de Levine blue agar deshidratado y lo mezclamos con 300ml de agua destilada en el vaso de precipitado, lo vertemos en la cazuela y esperamos 5 minutos que repose antes de ponerlo al calentador a hervir.

    

Una vez ha hervido, lo vertemos en el Erlenmeyer y le ponemos el algodón graso, esperamos a que enfríe un poco para poder emplacar. Una vez emplacado, esperamos que gelifique.

    

Ahora vamos a realizar la siembra sobre el medio de cultivo que hemos emplacado en la placa de petri. Cogemos el asa de siembra y flameamos, después enfriamos el asa de siembra en el medio de cultivo de donde cogeremos la bacteria y a continuación impregnamos el asa de siembra con la bacteria, de ahí cogemos la placa de petri que contiene el medio de cultivo que acabamos de preparar y realizamos la siembra, en este caso la hemos hecho por la técnica de los 3 giros. Por último llevamos la placa a la estufa de cultivo a incubar de 18 a 24h a 35-37ºC.

  

Y el resultado al día siguiente es este:

Práctica de yogur en Stomach

En esta práctica vamos a utilizar el Stomach, que es un homogeneizador de muestras que imita el movimiento del estomago "acción de stomaching" con dos placas accionadas por un motor y con calentador.

Primero de todo necesitaremos la muestra, hemos escogido yogur, cogemos 20gr de yogur y lo juntamos en una bolsa especial para stomach con 200ml de agua de pectona y lo llevamos al stomach.

        

     


Una vez terminado el proceso con el stomach, con pipeta automática cogemos una muestra de la bolsa de 1ml y la llevamos al primer tubo (previamente hemos cogido 5 tubos, los hemos enumerado, y añadido 10ml de agua destilada). Homogeneizamos con las manos en rotación, y con la pipeta automática cogemos de ese primer tubo 1 ml y lo pasamos al segundo; y así sucesivamente hasta terminar los 5 tubos.
        
  


Y aquí tenemos el resultado:

         

Tinción de gram de cultivo kliguer

En esta práctica vamos a realizar la tinción de gram de un medio de cultivo kliguer cogiendo de éste E.coli.

Los materiales a utilizar serán los siguientes:

- papel de filtro

- agua destilada

- mechero de alcohol

- pinzas

- asa de siembra

- pipetas pasteur

- porta

- violeta de genciana

- etanol

- lugol

- safranina

- microscopio

- aceite de inmersión

 

Primero flameamos el asa de siembra para coger la muestra E. coli del kliguer, y lo llevamos al porta con una gota de agua destilada previamente echada, mezclamos bien, y secamos al calor del mechero con cuidado

       

Una vez seco, vamos a proceder a la tinción de gram:

1º impregnamos la muestra con violeta de genciana y dejamos actuar 1 min.

Después sin aclarar de agua destilada, aclaramos con lugol y lo impregnamos dejándolo actuar 1 min.

Luego aclaramos con agua y decoloramos con alcohol durante 30seg y hasta que el alcohol que caiga por el porta salga incoloro.

Lavamos con agua destilada y lo impregnamos con safranina dejándolo actuar 3 min.

Por último lavaremos con agua destilada y secaremos al calor del mechero o al aire libre.

             

Una vez seco lo observamos al microscopio al objetivo x100 con aceite de inmersión

  

Tinción simple cultivo kliguer de E. coli

En esta práctica vamos a realizar una tinción simple de E. coli sembrado en cultivo kliguer y sembrarlo en cultivo VRGB.

Los materiales a usar serán los siguientes:

- papel de filtro

- agua destilada

- mechero de alcohol

- pinzas

- asa de siembra

- E. coli en cultivo kliguer

- Azul de metileno

- portaobjetos

- pipetas pasteur

 

Primero cogemos una muestra del cultivo de kliguer con el asa de siembra previamente flameada. No tenemos que olvidar que el mechero de alcohol tiene que estar siempre encendido para crear ambiente aséptico. En un porta echamos una gota de agua destilada e impregnamos en esa gota el asa de siembra con el E.coli, cogemos el porta con las pinzas y secamos al calor del mechero con cuidado que no se queme.

  

    
  

Una vez seco, vamos a proceder a la tinción simple, impregnamos el porta de azul de metileno y dejamos actuar 1 min más-menos. Cuando pase citado tiempo, aclaramos con agua destilada y secamos al aire libre o al calor del mechero agarrando el porta con las pinzas

    
    


Una vez seco lo observamos al microscopio en objetivo x10, x40 y x100. Este último objetivo lo hacemos con aceite de inmersión.