Microbiología e higiene de los alimentos 2º Dietética: Tinción simple y de gram con yogur y E. coli

En esta práctica, vamos a realizar una tinción simple con azul de metileno con yogur y una tinción de gram con E. coli.

Los materiales a usar son los siguientes:

-papel de filtro

-pipetas pasteur

-asa de siembra

-pinzas

-mechero de alcohol

-portas y cubres

-agua destilada

-alcohol

-violeta de genciana

-lugol

-safranina

-azul de metileno

Comenzamos cogiendo una muestra de yogur con el asa de siembra, y junto con una gota de agua destilada, lo ponemos en un porta y mezclamos bien para que se homogeinicen. A continuación lo ponemos a secar en el mechero pasándolo encima de la llama teniendo cuidado de no quemarlo. El asa de siembra antes de tomar la muestra se quema al fuego y después de usarlo también.

También tomamos una muestra de E. coli con el mismo procedimiento: quemar asa de siembra, tomar muestra (enfriandolo antes para no matar a los microorganismos), y junto con una gota de agua destilada lo ponemos en el porta y homogeneizamos, y lo secamos al fuego sin llegar a quemarlo.

Cogemos la muestra de yogur que tenemos en el porta ya seco, y comenzamos con la tinción simple con azul de metileno, poniendo una cantidad de este colorante de forma que cubra toda la muestra de yogur y esperamos 1 minuto a que haga efecto y aclaramos con agua destilada y dejamos secar al aire libre porque mientras se seca estamos haciendo también la tinción de gram.

Con la muestra de E.coli ya seca, le ponemos el violeta de genciana y lo dejamos actuar 1 min, y después sin aclarar, le echamos el lugol, arrastrándolo primero y después dejando una cantidad que actúe 1 minuto. Luego lavamos con agua destilada y a continuación echamos alcohol durante 30 seg hasta que el alcohol que estás echando caiga incoloro. Lavamos con agua y le echamos la fushina dejándola actuar 3 min y después lavamos con agua destilada. Secamos al aire libre o con la ayuda del mechero.